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 Exiqon公司microRNA LNA Knockdown探针
      Exiqon利用公司多年来的生物信息学经验优化设计的miRCURYTM LNA knockdown探针用于特异性抑制成熟miRNA的生物学作用。这种独特的knockdown 探针在体内、体外均能特异性地抑制成熟的microRNAs。 Exqion对于目前所有已知的脊椎动物、非脊椎动物和植物的microRNAs都有预制的miRCURYTM LNA knockdown寡核苷酸探针,用于分析miRNAs的功能。另外,Exiqon也可以根据客户需要定制miRCURYTM LNA knockdown寡核苷酸探针。

miRCURYTM LNA knockdown探针的主要优点
•  反义抑制效率高
•  特异性高
•  细胞毒性小
•  与标准的细胞转染方法兼容性好
•  生物稳定性高

抑制效率高
       miRCURYTM LNA knockdown探针有很强的抑制效果。标准浓度或者更低浓度的miRCURYTM LNA knockdown探针都能有效抑制miRNA(Fig.1)。
Fig.1 miRCURY™ LNA Knockdown探针对microRNA显著的抑制效果
miR报告载体携带了miR序列的互补区,能够显示miR的表达水平。对照则是不携带miR序列互补区的空载体(pMIR-no target)。将miR-报告基因(荧光素酶),pGL4.13-Renilla(用于做标准化)和针对特定has-mir的miRCURY™ LNA Knockdown探针,共同转入HeLa细胞中。用Dual-Glow™ Luciferase (Promega)进行表达水平的检测。miRCURY™ LNA Knockdown探针对特定has-mir的抑制作用达到了60%左右。
 
      与一些用于knockdown miRNA的标准方法相比,如普通DNA探针、基于2’-O-methyl化学修饰的探针,miRCURYTM LNA knockdown探针显示了很高的抑制效率(Fig.2)。
 
Fig.2 不同knockdown miRNA的几种方法比较
该图显示的是pMIR-21荧光素酶报告基因与针对hsa-mir-21做knockdown不同来源的寡核苷酸探针共转的结果。ProductA和B都是普通DNA寡核苷酸探针,2’-OMe是基于2’-O-methyl化学修饰的探针,以及miRCURYTM LNA探针,NC为阴性对照探针。以上都是在MCF7细胞中共转60小时后测得的结果。
 
特异性高
         如果探针与靶基因之间有一个碱基错配,抑制效果就会显著降低。我们的数据显示,当探针和靶基因之间有两个碱基错配时,探针的抑制效果就完全被削弱了(Fig.3)。这一点相当重要,因为在细胞中相关的miRs很可能序列极为相似,所以knockdown探针的特异性越高越好。
Fig.3 miRCURYTM LNA knockdown探针的错配识别能力
该图显示的是针对hsa-mir-21的完全配对knockdown探针和错配的knockdown探针的抑制能力。pMIR-21报告基因的上调倍数是不同程度的miRCURYTM LNA knockdown错配探针与对照相比得出的结果。实验所用的是Hela细胞,转染24小时后用Dual-Glow™ Luciferase检测报告基因的表达水平。
 
miRCURYTM LNA knockdown探针转染技术流程
1. 将培养到完全融合的细胞用胰酶消化后,计数,按1.5×106个细胞/瓶接种,加入5ml D-
    MEM完全培养基;
2. 培养1-2天至40-80%融合;
3. 将2ug miRCURYTM Knockdown 探针(或者Knockdown探针与报告质粒共转染)与8ul
    PLUS reagent混合,室温孵育15分钟;
4. 将12ul Lipofectamin 与125ul DMEM(不含血清、含抗生素和Glutamax)混合,加入孵
    育好的DNA-PLUS混合物,混匀;
5. 吸掉培养皿中的培养基,用4ml DMEM(不含血清、含抗生素和Glutamax)洗两次;
6. 将2ml DMEM(不含血清、含抗生素和Glutamax)加入到DNA/LipofectaminPLUS混合物
    中,混匀,迅速加入培养皿中,37℃、5%CO2培养箱中培养3小时;
7.  吸掉培养基,用4ml DMEM(不含血清、含抗生素和Glutamax)洗两次,添加新鲜DMEM
    (含有血清、抗生素、Glutamax),37℃、5%CO2培养箱中继续培养;
8. 培养的细胞即可用于后续生物实验。
 
*Glutamax:L-谷氨酰胺的衍生物,较其更为稳定。

Exiqon公司microRNA LNA Knockdown 探针产品列表:
 

Product Type

Product No.

Storage Temp

miCURY LNA microRNA inhibitor

 

 

miRCURY LNA microRNA inhibitor, 1 nmol

(4100001-4104908)-000

-20

miRCURY LNA microRNA inhibitor, 5 nmol

(4100001-4104908)-001

-20

miRCURY LNA microRNA inhibitor, 15 nmol

(4100001-4104908)-002

-20

miRCURY LNA microRNA inhibitor, 5 nmol, 5`-fluorescein labeled

(4100001-4104908)-011

-20

miRCURY LNA microRNA inhibitor, 5 nmol, 3`-fluorescein labeled

(4100001-4104908)-021

-20

miRCURY LNA Power microRNA inhibitor, 1 nmol

(4100001-4104908)-100

-20

miRCURY LNA Power microRNA inhibitor, 5 nmol

(4100001-4104908)-101

-20

miRCURY LNA Power microRNA inhibitor, 15 nmol

(4100001-4104908)-102

-20

miRCURY LNA Power microRNA inhibitor, 5 nmol, 5`-fluorescein labeled

(4100001-4104908)-111

-20

miRCURY LNA Power microRNA inhibitor, 5 nmol, 3`-fluorescein labeled

(4100001-4104908)-121

-20


miRCURY LNA inhibitor control

miRCURY LNA microRNA inhibitor negative control A, 1 nmol

199006-000

-20

miRCURY LNA microRNA inhibitor negative control A, 5 nmol

199006-001

-20

miRCURY LNA microRNA inhibitor negative control A, 15 nmol

199006-002

-20

miRCURY LNA microRNA inhibitor negative control A,  5nmol, 5`-fluorescein labeled

199006-011

-20

miRCURY LNA microRNA inhibitor negative control A,  5nmol, 3`-fluorescein labeled

199006-021

-20

miRCURY LNA microRNA inhibitor negative control B, 1 nmol

199007-000

-20

miRCURY LNA microRNA inhibitor negative control B, 5 nmol

199007-001

-20

miRCURY LNA microRNA inhibitor negative control B, 15 nmol

199007-002

-20

miRCURY LNA microRNA inhibitor negative control B,  5nmol, 5`-fluorescein labeled

199007-011

-20

miRCURY LNA microRNA inhibitor negative control B,  5nmol, 3`-fluorescein labeled

199007-021

-20

miRCURY LNA microRNA Power inhibitor negative control A, 1 nmol

199006-100

-20

miRCURY LNA microRNA Power inhibitor negative control A, 5 nmol

199006-101

-20

miRCURY LNA microRNA Power inhibitor negative control A, 15 nmol

199006-102

-20

miRCURY LNA microRNA Power inhibitor negative control A,  5nmol, 5`-fluorescein labeled

199006-111

-20

miRCURY LNA microRNA Power inhibitor negative control A,  5nmol, 3`-fluorescein labeled

199006-121

-20

miRCURY LNA microRNA Power inhibitor negative control B, 1 nmol

199007-100

-20

miRCURY LNA microRNA Power inhibitor negative control B, 5 nmol

199007-101

-20

miRCURY LNA microRNA Power inhibitor negative control B, 15 nmol

199007-102

-20

miRCURY LNA microRNA Power inhibitor negative control B,  5nmol, 5`-fluorescein labeled

199007-111

-20

miRCURY LNA microRNA Power inhibitor negative control B,  5nmol, 3`-fluorescein labeled

199007-121

-20


microRNA
产品信息
Exiqon公司microRNA芯片
Exiqon公司microRNA LNA Knockdown探针
Exiqon公司microRNA原位杂交检测探针及优化试剂盒
Exiqon公司microRNA PCR芯片
Arraystar公司miRStar™ qPCR配套试剂:cDNA Synthesis Kit
Arraystar公司miRStar™人肿瘤相关microRNA PCR芯片
Arraystar公司miRStar™ qPCR配套试剂:SYBR® Green Master Mix
Arraystar公司miRStar™ qPCR配套试剂:microRNA特异性PCR引物
Arraystar miRStarTM Cancer Focus miRNA PCR研究配套试剂
Exiqon miRNA研究配套试剂
技术服务
microRNA芯片技术服务
microRNA测序服务
microRNA实时定量PCR技术服务
microRNA PCR芯片技术服务
miRStar™ Cancer Focus microRNA PCR芯片技术服务
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microRNA表达异常的成因及临床意义
全球首次系统性检测高血压病人血浆中microRNA
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