康成生物LOGO   登录 | 注册 | English
 
 
 
 
站内搜索
 
 
  测序服务
 
  芯片服务
 
     
当前位置: 首页 > 产品 > 内容  
 Exiqon公司microRNA PCR芯片

  Exiqon miRCURY LNA™ Universal RT microRNA PCR芯片检测平台,基于LNA™专利技术,采用独特的Universal RT反应,实现对microRNA的准确定量检测,即使在总RNA含量较低的样本,如FFPE和血清/血浆中,也可以获得高质量的microRNA检测结果。

康成生物为您提供Exiqon公司miRCURY LNATM Universal RT microRNA PCR芯片——microRNA实时定量PCR芯片技术服务,全部实验皆使用进口试剂完成,使用的定量PCR仪器为美国应用生物系统公司生产的荧光定量PCR仪ABI PRISM® 7700或ABI PRISM® 7900。PCR芯片技术服务的主要流程包括:RNA抽提、RNA质量检测、cDNA模板制备、实时定量PCR、数据处理及制作实验报告。

Exiqon miRCURY LNA™ Universal RT microRNA PCR芯片列表

芯片名称
规格
物种
描述
microRNA Ready-to-Use PCR, Human panel I
384 well
372个常见的人类miRNA
microRNA Ready-to-Use PCR, Human panel I+II
384 well
752 个人类miRNA
microRNA Ready-to-Use PCR, Mouse&Rat panel I
384 well
小鼠,大鼠
372个常见的小鼠/大鼠miRNA
microRNA Ready-to-Use PCR, Mouse&Rat panel I+II
384 well
小鼠,大鼠
752 个小鼠/大鼠miRNA
Cancer Focus microRNA PCR Panel
96 well
84个癌症相关的miRNA
Serum/Plasma Focus microRNA PCR Panel
384 well
179个在血清、血浆样品中验证过的miRNA
Stem Cell Focus microRNA PCR Panel
96 well
85个与胚胎干细胞或多能诱导干细胞相关的miRNA

Exiqon的LNA™专利技术攻破MicroRNA PCR检测的两大难题
*  LNA™化学修饰提高引物和靶标分子的结合力,提高检测灵敏度,解决microRNA引物设计的难点:microRNA长度仅22nt左右,相当于一条普通oligo引物的长度,而PCR扩增需要上下游两条引物,因此传统的microRNA 的PCR方法仅一条引物为microRNA特异性,另一条采用通用引物,检测的特异性降低。 此外,microRNA的GC含量分布范围广: 5%-95%,由于A :T配对碱基的结合力要低于G :C配对,此GC含量低于50%的microRNA,即使整条序列都被一条普通的oligo引物覆盖,该引物的Tm值参数仍然难以达到PCR检测的要求(55-63℃),这个部分的microRNA用普通引物是不能得到有效扩增。LNA™专利技术能解决microRNA研究的难点,包括PCR检测。每个LNA™修饰位点能够提高引物Tm值3-8℃,因此在相同的PCR反应条件下(引物的Tm 值 60℃左右),可以通过加入LNA™缩短引物的长度,使得上下游都为microRNA特异性引物,PCR的特异性得到双重保障。而且更为重要的是,GC含量低的microRNA的PCR问题也能迎刃而解,控制加入LNA™的比例(GC含量低的microRNA检测引物加入多个LNA™修饰的碱基),使所有的microRNA都能得到有效的、均一的检测信号。
图1. 左图为LNA™( Locked Nucleic Acid )的化学结构,LNA是一种类寡核苷酸衍生物,提高引物和靶标分子的稳定性,能够增加引物的溶解温度(Tm值)。相同的Tm参数条件下,加入LNA可以缩短引物长度(右图)。
 
*  LNA™专利技术显著提高PCR反应的单碱基分辨能力,区分MicroRNA家族各成员: microRNA中存在多个家族(microRNA family),家族成员间序列相似性极高,个别成员间仅相差一个碱基。普通oligo引物无法分辨单碱基差异,即使有一个碱基错配也能继续PCR 反应,因此无法分辨极度相似的家族成员。LNA™修饰的引物具有单碱基分辨能力,其原理如下图所示。ΔTm=Tm(引物/完美匹配的靶标分子)-Tm(引物/单碱基错配靶标分子),加入LNA™后ΔTm值显著增加,PCR交叉反应的可能性大大降低。Tm(LNA 引物/单碱基错配)低于PCR反应温度,PCR反应条件下引物和错配分子处于解离单链状态不能进行PCR反应;Tm(LNA 引物/完美匹配靶标分子)高于60℃,产生有效的PCR扩增信号。

图2. 左图加入LNA™后ΔTm值显著增加,PCR交叉反应的可能性大大降低。右图,人工合成序列相似的microRNA 成员分子,用miRCURY LNA™ Universal RT microRNA PCR平台检测。如表所示,交叉反应的信号极低,有些情况下甚至没有。       

Exiqon miRCURY LNA™ Universal RT microRNA PCR芯片特点

1.灵敏度高:微量样本,无需预扩增,节省宝贵样本;对RNA量低的样本,如血清、血浆、FFPE、LCM等特殊样本尤其适用;LNA™ PCR系统检测单个microRNA仅需1pg总RNA(图3);而miRCURY LNA™ Universal RT microRNA PCR芯片在仅仅40ng总RNA中就可以检测730种microRNA的表达;LNATM PCR芯片灵敏度是同类芯片的10倍以上

2.特异性强:经LNATM 优化的PCR引物,可有效区分microRNA间的单碱基差异,并能区分成熟和前体microRNA;同时使背景信号值最小;
3.准确性高:LNATM PCR芯片上的引物均经过了实验验证;反转录采用Universal RT对各种不同的microRNA同时进行反转录,减少技术误差;对AT含量高的microRNA同样有效。
4.质控严格:每个panel均包含6个内参和2组质控对照;基于SYBR green的PCR方法,还可以提供溶解曲线以判断扩增特异性(图4)
5.高重复性:简化实验步骤,减少技术误差,实验重复性好(图5)

Exiqon miRCURY LNA™ Universal RT microRNA PCR 芯片如何实现高通量高质量的microRNA定量检测?
1. 独特的Universal RT反应:
     一次单链cDNA合成反应制备的cDNA可作为芯片所有microRNA PCR反应的模板(图6),减少操作步骤,消除技术误差,节省宝贵样本。同时避免了在芯片中使用混合RT引物对扩增特异性的影响。

6   Universal RT microRNA PCR反应原理

 

2. 基于LNA™专利技术的PCR扩增反应:
     实现引物Tm值均一,并同时保持microRNA扩增的高特异性和高灵敏度:
    miRCURY LNA™ Universal RT microRNA PCR芯片中所使用的microRNA特异性的PCR引物(PCR扩增上下游引物)都经过LNA™优化,并且经过严格的验证,能有效区分序列只差一个碱基的microRNA,并能区别成熟microRNA和microRNA前体,从而保证对靶microRNA的特异性扩增;同时,显著降低背景信号,从而增强对低丰度microRNA的准确检测。

3. 严格的芯片内参照和质控设置:
     miRCURY LNA™ Universal RT microRNA PCR芯片内设置了6个内参,包括:3个microRNA (hsa-miR-103, hsa-miR-191 and hsa-miR-423-5p),3个小RNA (U6, SNORD38B and SNORD49A)。这些内参在大量实验结果和多种组织的microRNA表达分析中均呈现出稳定的表达水平,但研究者也需要根据组织或细胞的实际情况选择最合适的、稳定表达的内参分析试验结果。
     同时,芯片内还设置了一个spike-in对照和一组3次重复的芯片间误差校正参照。

Exiqon miRCURY LNA™ Universal RT microRNA PCR芯片应用
1. miRCURY LNA™ Universal RT microRNA PCR芯片在LCM微量样本microRNA表达检测中的应用:
     由于miRCURY LNA™ Universal RT microRNA PCR 芯片要求的样本量较其他平台更少,对于LCM等微量样本尤其适用。(图7)

2. miRCURY LNA™ Universal RT microRNA PCR芯片在血清/血浆的microRNA检测中的应用:
   近年来,microRNA成为来源于血液来源的新生物学标记物,但由于采血量和microRNA分子大小及表达水平等限制,检测血液中的microRNA面临着诸多挑战。
      miRCURY LNA™ Universal RT microRNA PCR芯片具有无与伦比的灵敏度和检测特异性,即使对血清/血浆等含微量总RNA的样本,也可实现对microRNA的高质量检测;并且无需对cDNA进行预扩增。(图8)

microRNA
产品信息
Exiqon公司microRNA芯片
Exiqon公司microRNA LNA Knockdown探针
Exiqon公司microRNA原位杂交检测探针及优化试剂盒
Exiqon公司microRNA PCR芯片
Arraystar公司miRStar™ qPCR配套试剂:cDNA Synthesis Kit
Arraystar公司miRStar™人肿瘤相关microRNA PCR芯片
Arraystar公司miRStar™ qPCR配套试剂:SYBR® Green Master Mix
Arraystar公司miRStar™ qPCR配套试剂:microRNA特异性PCR引物
Arraystar miRStarTM Cancer Focus miRNA PCR研究配套试剂
Exiqon miRNA研究配套试剂
技术服务
microRNA芯片技术服务
microRNA测序服务
microRNA实时定量PCR技术服务
microRNA PCR芯片技术服务
miRStar™ Cancer Focus microRNA PCR芯片技术服务
相关文献
microRNA表达异常的成因及临床意义
全球首次系统性检测高血压病人血浆中microRNA
Nature子刊:应用Exiqon miRNA qPCR Panel,探索胃癌血浆标志物
准确检测血清血浆样本中microRNA的利器与应用
Nature Immunology最新文章:miRNA与表达谱芯片联合应用,揭秘IFN-a抗病毒作用新机制
利用Exiqon microRNA芯片探索缺氧性肺动脉高压(PHP)病因最新成果
回到页首
 
  沪ICP备16042410号 ©Copyright 2007 KangChen Bio-tech Inc. All rights reserved.
版权声明  |  关于康成  |  联系我们