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 外泌体分离
      要研究外泌体,首先就必须获得外泌体。目前外泌体分离方法主要有以下几种:

分离方法
原理
优势
劣势
超速离心
利用差速离心的方法分别将细胞碎片、大的囊泡及其他的杂质去除,最后得到外泌体
最常用的外泌体纯化手段,可分离到大小相近的囊泡颗粒。操作简单,获得的囊泡数量较多
对于血清血浆样本,分离效率较低,纯度不够。操作费时,回收效率不稳定
密度梯度离心
将超速离心与蔗糖密度梯度联合使用,根据外泌体的密度特性来进行分离纯化
得到的外泌体纯度最高
周期长,操作繁琐,且此方法对超离的时间要求非常高。
色谱法
根据凝胶孔隙的孔径大小与样品分子尺寸的相对关系而对溶质进行分离的分析的方法
区分大的和小的囊泡,保持外泌体结构的完整性
一次处理一个样本,耗费时间较多,需要特殊的设备,应用不广泛
超滤
由于外泌体是一个大小约几十纳米的囊状小体,大于一般蛋白质,利用不同截留相对分子质量(MWCO)的超滤膜对样品进行选择性分离,便可获得外泌体
简单高效,且不影响外泌体的生物活性
从超滤膜上回收外泌体损失大,且在处理过程中外泌体结构遭到破坏
多聚物沉淀
聚乙二醇(PEG)为常用的多聚物,可与疏水性蛋白和脂质分子结合共沉淀,进而利用此原理分离外泌体
操作简单,快捷
纯度和回收率低,杂蛋白较多(假阳性),颗粒大小不均一,产生难以去除的聚合物,机械力或者吐温-20等化学添加物将会破坏外泌体
免疫亲和
外泌体表面有其特异性标记物(如CD63、CD9蛋白),用包被抗标记物抗体的磁珠与外泌体囊泡孵育后结合,即可将外泌体吸附并分离出来
特异性高、操作简便、不影响外泌体形态完整
效率低,外泌体生物活性易受pH和盐浓度影响,不利于下游实验

表2.外泌体分离方法的总结比较

      鉴于目前的外泌体提取方法的各自的优缺点,康成生物结合现有的方法以及相关的资料,开发出新的外泌体分离方法,与现有的方法相比具有以下优点:
1:操作简单,快捷,对于血清血浆样本只需1.5-2h即可拿到外泌体;
2:纯度高:血液样本中高丰度污染蛋白含量非常低(对于蛋白组学实验特别重要);


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