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 分子生物学抗体芯片技术简介
  抗体芯片是最近发展起来的一种技术,可以同时检测几百种蛋白质表达水平,也可以用来研究蛋白质翻译后加工(磷酸化水平改变)或者研究蛋白质间相互作用,其原理是:大量不同抗体被按照预定的顺序排列并固定在固体支持物上且保留有结合其相应抗原的能力,可以在和蛋白质样品一起孵育的程度中识别并捕捉抗原。因此抗原以及与抗原相连的蛋白质就可以被芯片结合用来进行研究。
 
A:蛋白质表达谱检测
抗体芯片可以用来检测两个不同样品之间蛋白质的表达水平的相对差异,一次实验可以比较出数百种蛋白质的表达水平变化。
  • 高通量:一次实验能同时检测数百个乃至于上千个蛋白质的表达水平变化。
  • 样品用量少:减少珍贵样品的用量。
  • 特异性高:假阳性率低。
  • 实验周期短:操作简单,加快研究进程。
 
操作流程如图:
 
B:蛋白质磷酸化的检测
  蛋白质的生物学功能不仅仅在表达水平上受到调节,并且其翻译后修饰作用也被生物体广泛用于起功能调节。蛋白质通过激酶磷酸化和磷酸酶去磷酸化可以调节蛋白质的活性、定位及其稳定性。由于蛋白质的磷酸化在生物体内信号传导过程中起到相当重要和广泛的作用,因此对于蛋白质的磷酸化检测具有重要的生物学意义。
  蛋白质磷酸化检测芯片上以阵列的形式排列了多种蛋白质对应的抗体,首先蛋白样品在一定条件下与芯片孵育,相应的蛋白就可结合到相应的抗体上。然后用荧光染料(如Cy3、Cy5等)标记的磷酸化酪氨酸(或是丝氨酸、苏氨酸)的抗体与芯片孵育,使之与芯片结合。芯片经激光扫描仪扫描,所得的信号强度与该位点抗体所针对蛋白的磷酸化水平相对应。相对其他研究蛋白质磷酸化的技术(如western blot)而言,蛋白质磷酸化芯片的筛选方法要可以同时处理多个样品,检测数百个乃至于上千个蛋白质的磷酸化程度。这一技术作为一种高通量的定性分析工具,可以用于检测刺激、药物处理后某些信号通路的激活、特定蛋白的活化等相关信息。
  • 高通量:一次实验能同时检测数百个乃至于上千个蛋白质的磷酸化水平。
  • 样品用量少:减少珍贵样品的用量。
  • 特异性高:假阳性率低。
  • 实验周期短:操作简单,加快研究进程。

 
C:蛋白质相互作用的检测
  当你要研究某一蛋白靶蛋白与其他蛋白相互作用时,你可以通过蛋白质相互作用芯片进行检测。芯片上以阵列的形式排列了多种蛋白质对应的抗体,首先蛋白样品在一定条件下与芯片孵育,相应的蛋白就可结合到相应的抗体上,由于蛋白质相互作用,靶蛋白通过蛋白质相互作用也可间接地连接在芯片其他不对应的抗体位点上。利用靶蛋白所对应的一抗与芯片孵育,抗体结合到这些所有位点。然后用荧光染料(如Cy3、Cy5等)标记的二抗与芯片孵育,使之与芯片结合。芯片经激光扫描仪扫描,所得的信号强度与该位点抗体所针对蛋白与靶蛋白相互作用能力成正比。相对其他研究蛋白质相互作用的技术而言,蛋白质相互作用芯片的筛选方法要简便的多,实验周期更短。
  通过蛋白质相互作用芯片技术,你可以同时处理多个样品,检测靶蛋白与数百个乃至于上千个蛋白质的相互作用。这一技术作为一种高通量的定性分析工具,可以用于筛选与靶蛋白相互作用的相关蛋白质,从而研究蛋白在细胞中某些信号通路中的定位,及其可能的生物学功能。
  • 高通量:一次实验能同时检测数百个乃至于上千个蛋白质的相互作用。
  • 样品用量少:减少珍贵样品的用量。
  • 特异性高:假阳性率低。
  • 实验周期短:操作简单,加快研究进程。
 
 
 
 
 

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