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 DNA实验样品采集、保存方法
1. 适用范围及样品量
适用范围
适用于ChIP-Chip(Seq)、MeDIP-Chip(Seq),及hMeDIP-Chip(Seq)样本的准备。

样本量

2. 悬浮细胞
约1×107个细胞,低速离心收集,弃去培养液;
加入2~5 ml PBS悬浮细胞,转入小离心管中;
低速离心沉淀细胞,弃去PBS;
放入-70℃冰箱保存。
 
对于ChIP-Chip实验,为获得理想结果,建议根据下述方法处理及保存悬浮细胞样品:
取107悬浮细胞低速离心,用10ml培养基将细胞沉淀重悬于50ml离心管中;
加入270ul 37%的甲醛(本公司可提供),轻轻混匀,室温孵育10分钟;该步骤最好在通风橱中完成;
加入1ml 1.25M的苷氨酸(本公司可提供),轻轻混匀,室温孵育5分钟,中和甲醛;
2000×g离心5分钟,弃上清,用预冷的1×PBS/EDTA洗细胞两遍;
2000×g离心5分钟,弃上清;
收集到的样品-80℃冻存。
 
3. 贴壁细胞
约1×107个贴壁细胞,胰酶消化;
加入PBS悬浮细胞,低速离心收集,弃去液体;
加入2~5 ml PBS悬浮细胞,转入小离心管中;
低速离心沉淀细胞,弃去PBS;
放入-70℃冰箱保存。
 
对于ChIP-Chip实验,为获得理想结果,建议根据下述方法处理及保存贴壁细胞样品:
将10 cm培养皿中(107细胞)旧的培养基吸掉,添加10 ml新鲜培养基;
加入270 ul 37%的甲醛(本公司可提供),轻轻混匀,室温孵育10分钟;该步骤最好在通风橱中完成;
加入1ml 1.25M的苷氨酸(本公司可提供),轻轻混匀,室温孵育5分钟,中和甲醛;
将皿中的混合液吸掉,用预冷的1×PBS / EDTA洗细胞两遍,加入1 ml含有1×protease inhibitor cocktail的1×PBS,用细胞刮将皿底的细胞刮下,收集到1.5 ml离心管中;
2000×g离心5分钟,弃上清;
收集到的样品-80℃冻存。
 
4. 组织
采集新鲜组织(注意:生物体死亡后10分钟内取材料并保存好);
组织块以PBS或生理盐水清洗干净,切为小块;
放入液氮或-70℃冰箱中保存。
 
5. 血液类样品
● 详见:血液类样品采集、保存方法。

样品的采集、保存与运输
相关文献
血液类样品采集、保存方法
RNA实验样品采集、保存方法
DNA实验样品采集、保存方法
蛋白实验样品采集、保存方法
样品保存和运输
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