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 血液类样品采集、保存方法
1. 适用范围及样品量
● 适用范围
全血/血细胞:


血清/血浆:

 
样本量

在样品保存及转移的过程中,应避免反复冻融样品。
一般建议用新鲜的血液标本进行实验。如果标本已经保存较长时间,请联系康成技术部, 以确认样本是否适合进行实验。
 
2. 全血
请按照实际使用的收集方法,如注射器收集或真空收集管等,参考相应的厂商提供产品说明进行操作。
采集好全血,将采集好的全血转移至单独的冻存管,按照每400~500ul/管分装好。
短期保存,可放入-20℃或-70℃冰箱。长期保存,请放入液氮。
 
3. 血浆
使用抗凝管采集全血,并尽快进行血浆分离:1000g 离心10 分钟,分离血浆和细胞组分。(注意:血浆收集应使用抗凝管,抗凝剂可以用柠檬酸钠或EDTA 等,但一定不要使用肝素抗凝,因为肝素对后续实验有较大影响。)
将采集好的血浆转移至单独的冻存管,按照每400~500ul/管分装好。
短期保存,可放入-20℃或-70℃冰箱。长期保存,请放入液氮。
4. 血清
使用凝血管采集全血,采血后两小时内分离血清。
采血后轻轻倒转采血管混合4~5次,直立置于室温待血液完全凝固(一般约一小时),1000g离心10分钟,分离血清。
将采集好的血清转移至单独的冻存管,按照每400~500ul/管分装好。
短期保存,可放入-20℃或-70℃冰箱。长期保存,请放入液氮。
 
5. 从全血中提取白细胞
5.1 抗凝血收集
取无菌的15ml离心管一只,首先用EDTA或者柠檬酸钠溶液充分吹打管壁,使离心管壁完全接触到该溶液,而后在管底留下少许该溶液(200ul左右)收集5ml全血后迅速用枪混匀或用手指拨动离心管底部混匀。防止部分全血凝固。(也可直接用医院里的抗凝管收集)
 
5.2 全血白细胞分离(以3 ml抗凝血为例说明)
向一只15ml离心管中加入3ml抗凝血,而后加入9ml红细胞裂解液。盖紧管盖,温柔的颠倒混匀数下。请不要剧烈振荡。
将离心管至于室温放置10 min(5~10 min,不要超过10 min)
将离心管以2500xg离心5 min
弃上清,尽可能将上清吸净,勿吸到管底白色班块细胞。
弃去上清后在管底出现可见的白色班块,此白色班块为富集的白细胞。如果裂解不完全(白色班块里还有红色细胞),加入1ml PBS 缓冲液重悬,然后重复第一步。
充分裂解后,可用1ml PBS 缓冲液清洗一次,2500xg离心5 min。
弃上清,可获得血液样品中全部白细胞的80%以上。而后可加入适量Trizol(根据细胞数量而定5×106/ml)后,用移液器充分吹打,混匀,直至出现清亮不粘稠的液体,(表示细胞充分裂解)。
而后可以把以上的Trizol 试剂保存在生物冰中(0~4°C 即可)寄送,或者直接干冰寄送。

样品的采集、保存与运输
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