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 RNA 实验样品采集、保存方法

1. 适用范围及样品量
 l 适用范围:

类别 实验项目
Microarray Service miRNA Microarray
LncRNA Microarray
LncPathTM Microarray
CircRNA Microarray
Gene Expression Microarray
T-UCR Microarray
piRNA Microarray
Sequencing Service MiRNA Sequencing
RNA Sequencing
tRF & tiRNA sequencing
tiRNA sequencing
tRNA Sequencing
LncRNA Sequencing
CircRNA Sequencing
piRNA Sequencing
MeRIP Sequencing
PCR Array or RT-PCR Service nrStarTM PCR Array
miRStarTM microRNA PCR Array
nuStarTM mRNA PCR Array
功能分类PCR Array
Exiqon microRNA PCR芯片
microRNAReal-time PCR
mRNA Real-time PCR
LncRNA Real-time PCR
CircRNA Real-time PCR
tRF & tiRNA Real-time PCR
LC-MS Service LC-MS tRNA Modification Analysis

 l 样本量(除MeRIP-seq外)

样本 样本量
动物组织样品 50-100mg
哺乳动物培养细胞样品 5×106 
(悬浮细胞)
哺乳动物培养细胞样品 10-15 cm2
(贴壁细胞)
植物组织样品 100m g-1g,根据植物不同部位的组织决定 组织需要量,尽可能量多些,但不必超过 1g

2. MeRIP-seq样品量

样本 样本量
动物组织样品 150-300mg
哺乳动物培养细胞样品 2.5×107 
(悬浮细胞)
哺乳动物培养细胞样品 50-75 cm2
(贴壁细胞)

3. 动物组织样品
 3.1 冻存组织
 l 生物体死亡后尽快(最好在 10 分钟内)切取新鲜组织,以 PBS 或生理盐水清洗干净 切为小块;
 l 立刻放入液氮中冷冻 2-3 小时后可转入-70℃冰箱保存或者一直保存在液氮中。
 l 冻存组织可放入干冰中直接运输,或者以 Trizol 4℃下匀浆:冻存的组织块以液氮研磨 后加 Trizol 或直接加 Trizol 以电动匀浆器匀浆。
 3.2 新鲜组织样品
A、使用 Trizol 试剂
 l 取新鲜组织(注:生物体死亡后 10 分钟内取材料并保存好),组织块以 PBS 或生理盐水清洗干净,每 50-100 mg 组织加 2ml 左右 Trizol 溶液彻底匀浆裂解组织样品,操 作最好在冰上进行。匀浆的裂解液 4℃短期保存(1 个月),-20℃或-70℃长期保存。
B、使用 RNAlater 试剂
 l 取新鲜组织(注:生物体死亡后尽快在 10 分钟内取材),组织块以 PBS 或生理盐水清 洗干净,所用组织必须切至厚度在 0.5 cm 以下(建议米粒大小),然后放入装有 5 倍 体积 RNAlater 的离心管(或冻存管)中。
 l 4℃孵育过夜,此时样品管需要横置以便组织块充分接触到 RNAlater,然后转入-20℃中保存。样品在-20℃不会冻结,但是溶液中可能有一些晶体出现,这并不影响后续的RNA 抽提。

4.  哺乳动物培养细胞样品——使用 Trizol 试剂(不建议使RNAlater)
注意事项:
 l Trizol 建议选用 Sigma/ Invitrogen。
 l 细胞计数一般存在误差,Trizol 的用量一般随着样品量的增加而增加。悬浮细胞计数超过2×106 个细胞,使用>1ml  Trizol。
 4.1 悬浮细胞
 l 悬浮细胞培养液倒入离心管中,离心沉淀细胞,弃去上清液。
 l 细胞沉淀(5×106 个细胞)中加入  1.5- 2ml 的 Trizol 裂解液。
 l 反复吸打几次后,目视可见细胞层溶解完全。
 l -70℃保存。
 4.2 贴壁细胞
 l 从培养容器中吸出并弃去培养液;
 l 培养瓶中直接加入 Trizol 试剂,Trizol 用量与细胞贴壁面积有关,约 10-15cm2 细胞(具体请根据细胞数目调整)贴壁面积加入 1- 2ml Trizol;
 l 反复吸打几次后,目视可见细胞层溶解完全;
 l -70℃保存。

5. 植物组织样品
 l 准确取得所需新鲜组织后,如有必要可用 PBS 清洗干净,将所用组织切碎,装入冻存 管中或者用锡箔包裹好;
 l 立即投入液氮中保存。

6 血液类样品
 l 详见:血液类样品采集、保存方法。


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