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 代谢组学实验样本采集、保存方法

1.适用范围及样品量
    l 适用范围

类别 实验项目
代谢组学服务 非靶向代谢组学
靶向代谢组学

    l 样品量

样本 样本量
细胞 5×106
组织 50-100mg
体液样品(血浆、血清、尿液) >500ul

2.血清和血浆采集
 2.1  血清收集

A   室温分离血清
 l 采集血液样本,并将其置于不含抗凝剂的试管内。
 l 室温下自然凝集2-4h(防暴晒),血液凝固后自然析出的即是血清。
B   快速离心采集
 l 采集血液样本,并将其置于不含抗凝剂的试管内。
 l 室温下自然凝集30-60min,待血液凝固。
 l 以2000-3000rpm的速度离心5-10min,上清液即为血清。
 l 保存于-80℃冰箱。
2.2 血浆采集
 l 采集血液样本,置于含有适量抗凝剂的采集管内。
 l 反复颠倒采血管,使抗凝剂与血液充分混匀。
 l 以2000-3000rpm离心10min,上清液即为血浆。
 l 保存于-80℃冰箱。
注意: 血液采集后,室温放置1h内进行离心处理,若放置于冰上,需要在4h内进行处理。

3.细胞样品采集
3.1 悬浮细胞采集
培养箱取出细胞后迅速处理:
 l 吸取含约5×106-5×107细胞的细胞培养液,加入5倍体积-20℃预冷的quenching buffer :60%的甲醇(含0.85% NH4HCO3),轻微混匀后,1500×g离心3min收集细胞。
 l 重复洗涤操作1次,离心去上清,获得细胞沉淀。
 l 液氮速冻,-80℃保存。
注:为保证检测结果真实反应细胞代谢物水平,以上步骤最好由客户完成。如果客户不能进行上述操作,可参考直接收集悬浮细胞沉淀。需要提醒的是,如果客户收集细胞过程中不进行上述处理,我司在实验前也不再进行上述处理。

3.2 贴壁细胞采集
培养箱取出细胞(例10cm培养皿,5×106-5×107细胞)后迅速处理:
 l 去除培养液,加入5-10ml -20℃预冷的quenching buffer:60%的甲醇(含0.85% NH4HCO3)。轻微晃动培养皿,使得quenching buffer覆盖所有细胞,迅速去除quenching buffer。重复上述操作1次,尽量去除洗涤液。
 l 加入预冷的PBS至培养皿,小心刮取细胞,收集至离心管。
 l 离心500-1000×g,5min,去上清,得细胞沉淀(尽量去除上层液体,不要有残留)。
 l 液氮速冻,-80℃保存。
注:为保证检测结果真实反应细胞代谢物水平,以上步骤最好由客户完成。如果客户不能进行上述操作,可参考直接收集贴壁细胞沉淀。需要提醒的是,如果客户收集细胞过程中不进行上述处理,我司在实验前也不再进行上述处理

4.组织样品采集
 l PBS洗涤去除残留血液和污染物,迅速剥去脂肪和筋皮等结缔组织,冲洗干净。
 l 用组织剪或手术刀将组织分离成1cm3左右的小块。
 l 液氮速冻,-80℃保存。

 


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